Como se realiza o teste de sífilis na placa escavada de Kline?
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Procedimentos
-Para soro:
Teste qualitativo:
-Transferir 50ul da amostra e para o centro de um círculo da placa de vidro e 50ul de
uma diluição 1/8 noutro círculo (para evitar o efeito pró-zona)
– Transferir 50ul de cada amostra controle reagente e não-reagente para a placa;
-Homogeneizar a suspensão antigênica no frasco conta-gotas cuidadosamente,
através de movimentos suaves de inversão ou por rotação ente as palmas das mãos
durante 1 minuto, e mantendo o frasco na vertical adicionar 1 gota (50u l) desta o cada
círculo contendo amostras,homogeneizando a seguir;
-Colocar a placa em um agitador mecânico e agitar durante 4 minutos a 180 +2rpm
-Ler os resultados dentro de 1 minuto ao microscópio em aumento 100x(ocular e
objetiva de 10x);
–As amostras reagentes apresentam aglomerados de antígeno visíveis ao
microscópio; as amostras não reagentes apresentam uma mistura homogênea.
–Teste quantitativo (Para amostras reagentes no teste qualitativo):
–Colocar 50ul de solução fisiológica estéril nos círculos de 2 a 4 da placa.
–Dispensar 50ul da amostra no círculo 1 e no círculo 2
–Misturar o soro e a solução fisiológica no círculo 2 por aspiração 8 vezes.
–Transferir 50ul do círculo 2 para o círculo 3 e misturar, em seguida transferir igual
quantidade do círculo 3 para o círculo 4, desprezando os últimos 50ul; obtêm-se as
diluições ½,1/4 e 1/8 respectivamente. A partir deste ponto procede-se como no
teste qualitativo
–O título é considerado a mais alta diluição que apresenta reatividade.
–Procedimento para LCR:
–Preparar a suspensão antigênica adicionando uma parte de salina a 10% a uma
parte da suspensão antigênica (mistura estável por 2h) e homogeneizar
suavemente por inversão ou rotação durante 5 minutos.
– Proceder ao teste como indicado para soro usando uma gota de suspensão de 0,01
ml e, caso a amostra seja reagente, determinar seu título.
Abração